本研究克隆了日本落叶松体细胞胚胎发生相关受体类蛋白激酶基因 LaSERK1，并检测了在不同培养条件下LaSERK1的表达情况，发现LaSERK1与已发现的其他物种SERK1 基因有高度相似性，qRT-PCR结果显示： LaSERK1在体胚发生早期高表达。结果表明：LaSERK1可能在落叶松体胚发育早期起重要作用，LaSERK1 也可能成为早期胚性细胞的标记基因。

[目的]探讨miR396在落叶松体细胞胚胎发生中的功能.以期该研究能为解决体胚发育中子叶畸形胚与生根率低的问题提供新的视角,同时也为进一步揭示体胚发育的分子调控网络做基础铺垫.[方法]构建pre-miR396超表达载体,通过农杆菌介导侵染,将pre-miR396转入落叶松胚性细胞中,筛选稳定抗性细胞系.在DNA与RNA水平上,对抗性细胞系进行的鉴定、检测,同时统计比对其与野生细胞系间发芽率、叶片数目以及生根率的差异.[结果]在抗性细胞系基因组中,扩增出HTP与miR396的特异性片段,且无农杆菌Virg基因片段.RNA表达水平上,抗性系pre-miR396与miR396表达皆增加,而靶基因LaGRFs的表达量下调.统计表明抗性系胚的发芽率、生根率、叶片数目畸形率分别为70.60%、0.60%、37%,而野生型分别为92.50%、10.55%、4%,抗性系胚的发芽率、生根率显著降低(Sig.=0.000),叶片数目畸形率显著增加(Sig.=0.000).[结论]miR396在落叶松体细胞胚胎发生过程中,可能通过负调节靶基因LaGRFs的表达或者通过LaGRFs影响与它相互作用的基因,参与体胚子叶原基细胞代谢,从而影响了子叶与叶片的发育;通过负调节LaGRFs或者其它与根部发育相关的靶基因,影响了根端分生区细胞的活动,参与调控根的发育.

目的 通过研究LaSPL2和LaSPL3的分子特征和表达模式，揭示其在落叶松体细胞胚发育中的功能。 方法 利用同源克隆及RACE技术，获得LaSPL2和LaSPL3的全长cDNA序列，通过生物信息学分析其编码蛋白保守结构域、进化关系等，利用烟草瞬时表达体系进行亚细胞定位研究，采用qRT-PCR检测2个基因在落叶松体细胞胚发育过程的表达模式。 结果 本研究获得了2个落叶松SPL同源基因LaSPL2和LaSPL3，分别编码532个氨基酸和191个氨基酸，其cDNA序列均存在miR156识别位点。多序列比对分析发现：它们均具有保守的SBP结构域。亚细胞定位结果显示：LaSPL2和LaSPL3定位于细胞核中。qRT-PCR结果表明：在落叶松体细胞胚发育早期，ABA下调LaSPL2和LaSPL3表达；随着体细胞胚的进一步发育，LaSPL2和LaSPL3的表达水平分别在10 d和14 d达到峰值；之后随着体细胞胚发育成熟，它们的转录水平逐渐下降，并在42 d达到最低值。 结论 通过分析ABA缺失对LaSPL2和LaSPL3表达的影响，表明ABA可能是落叶松体细胞胚发育早期LaSPL2和LaSPL3下调表达的主要因子；LaSPL2和LaSPL3的表达量在体细胞胚发育的早期阶段均达到最高峰，表明它们可能是早期胚胎形成的一个重要调控因子；LaSPL2和LaSPL3序列分析及表达模式，表明它们在体细胞胚发育中可能受miR156调控，并在体细胞胚的成熟过程中具有重要意义。

目的 研究并了解中间锦鸡儿CiDR1基因功能及其对干旱胁迫的响应，为抗性育种提供候选基因。 方法 通过RACE技术从中间锦鸡儿中克隆CiDR1基因的cDNA全长，利用生物信息学分析软件对其基因结构及功能进行分析和预测。再通过qRT-PCR技术对干旱胁迫后的幼苗中的CiDR1表达模式进行研究。 结果 从中间锦鸡儿中克隆到CiDR1基因的cDNA全长共计4 297 bp，GenBank登录号为KP277100。生物信息学分析表明，预测的CiDR1蛋白序列中含有1 243个氨基酸残基，具有抗病基因特征结构域TIR、NB-ARC、LRR等，其等电点为6.35，不稳定指数为42.91，不具备信号肽，为非分泌蛋白，定位于细胞质中。定量PCR检测发现，CiDR1基因在幼年期的茎中表达量较低，在成年期的叶片中表达量较高；在干旱胁迫处理后的幼苗中，CiDR1表达水平有明显下降，表明该基因的表达受干旱抑制，可能与中间锦鸡儿适应干旱相关。 结论 中间锦鸡儿在干旱胁迫后其根、茎和叶中CiDR1的表达均明显下降，表明CiDR1的表达受干旱抑制，可能与中间锦鸡儿适应干旱相关，进一步研究发现CiDR1在根、茎、叶中的表达水平可能受发育阶段调控。